Шевченко А.А., Шевкопляс В.Н., Черных О.Ю., Шевченко Л.В

Рекомендации по лабораторной диагностике энтеробактериальных инфекций животных. Краснодар, 2008. 101с.

В рекомендациях освещены возбудители инфекционных болезней животных, вызываемые патогенными энтеробактериями, методы их лабораторной диагностики и питательные среды для выращивания.

Для студентов высших учебных заведений по специальности «ветеринария», аспирантов, научных сотрудников.

РЕЦЕНЗЕНТЫ:

И.А. Болоцкий – доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией Краснодарского НИВИ.

Ю.Ф. Мишанин - доктор биологических наук, академик РАЕ,

профессор Кубанского государственного технологического

университета.

Представители семейства Enterobacteriaceae являются грамотрицательными, аэробными или факультативно анаэробными палочками. Подвижные за счет перетрихиальных жгутиков, реже — неподвижные. Большинство видов хорошо растет при 37° С, однако некоторые виды лучше растут при 25-30° С. D-глюкозу и другие углеводы ферментируют с образованием кислоты, а многие виды, кроме того, и газа. Оксидазоотрицательные, каталазоположительные, редуцируют нитраты в нитриты. Распространены повсеместно. Встречаются на растениях, у животных (от червей и насекомых до млекопитающих) и человека. Присутствуют в почве, воде и даже в воздухе. Они существуют как симбионты, сапрофиты или паразиты. По патогенности для человека, животных и растений весьма разнообразны. Отдельные роды (напр., Erwinia и др.) известны как фитопатогены, причиняющие урон злакам и картофелю, другие (напр., Serratia) распространены в воде, являются фитопатогенами, обитают у насекомых, способны вызывать спорадические инфекции холоднокровных, домашних, диких животных и человека. Многие роды имеют медицинское значение, вызывая желудочно-кишечные болезни, являясь причиной оппортунистических инфекций.

В ветеринарии на первое место выступают роды Escherichia, Salmonella и Yersinia. Кроме того, определенное значение имеют роды Klebsiella, Morganella, Proteus. Эти микроорганизмы вызывают желудочно-кишечные болезни и могут быть возбудителями различных внекишечных инфекций, таких, как бактериемия, менингит, инфекции мочевыводящих путей, дыхательных путей, раневые инфекции и др.

Лабораторная диагностика включает выявление методом световой микроскопии, выделение чистой культуры возбудителя посевом на питательные среды, идентификацию энтеробактерий по морфологическим, тинкториальным, культуральным, серологи-ческим и патогенным свойствам; дифференциацию родов энтеробактерий.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики используют фекалии, кровь, мочу, молоко. Посмертно в лабораторию направляют трупы мелких животных и птиц целиком, трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лимфоузлы, отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой (упаковывается отдельно от остального материала), легкие. При абортах с подозрением сальмонеллезной их этиологии (отмечают у конематок и овцематок) для бактериологической диагностики направляют абортированный плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, его паренхиматозные органы.

Сбор фекалий осуществляют в стерильную посуду сразу после дефекации. Можно собирать материал непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных ватных или ватномарлевых тампонов, укрепленных на деревянной палочке или проволочной петле. Посев фекалий желательно осуществлять непосредственно после их сбора или в пределах 2-3 часов после сбора. Если это невозможно, материал консервируют хранением при температуре 2-6° С или глицериновой смесью.

Лучшие результаты для получения гемокультуры дает посев крови, взятой в самом начале болезни, однако при отрицательных результатах целесообразен повторный посев крови в течение всего периода лихорадки. В отдельных случаях для посева на гемокультуру можно использовать сгустки крови, направляемой для серологических исследований.

Другой материал отбирают общепринятыми способами. Во всех случаях его берут от животных, не подвергавшихся в последние 10 дней лечению антибактериальными препаратами.

Выделение и первичная идентификация культур энтеробактерий. При наличии паренхиматозных органов или целых трупов (плодов) из исходного материала готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Энтеробактерий представляют собой грамотрицательные, прямые палочки длинной 1,0-3,0 мкм и диаметром 0,3-0,6 мкм. Располагаются одиночно, реже попарно. Для некоторых характерно наличие капсулы или микрокапсулы. Спор не образуют.

При наличии иного материала исследования начинают с посева на питательные среды. Рекомендуемые плотные и жидкие питательные среды для выделения энтеробактерий в зависимости от исследуемого материала и предполагаемого возбудителя приведены в таблице 1.

Для посева проб материалов, обычно содержащих разнообразную микрофлору (фекалии, околоплодная жидкость и др.), наиболее целесообразно применять высокоселективные среды (висмут-сульфит агар, агар Плоскирева). Для проб, обычно не содержащих или содержащих незначительное количество микроорганизмов (кровь, паренхиматозные органы и др.), — слабоселективные дифференциальные среды (агары Левина, Эндо). Однако, учитывая возможность выделения из фекалий и другого материала в качестве возбудителей не только патогенных, но и условно-патогенных энтеробактерий, которые могут сильно подавляться на высокоселективных средах, оптимальным является одновременное применение тех и других сред. При исследовании проб, в которых концентрация возбудителя, скорее всего, низка, целесообразно использовать среды накопления. Фекалии перед посевом на плотные среды суспендируют в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:10. При взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду обогащения (накопления). Пробирки с посевами помещают в термостат, а по окончании инкубации (12-18 час) делают высевы на плотные селективные среды.

Цитратную кровь засевают в жидкие среды накопления в соотношении 1:10. Для посева сгустков крови после их асептического «обведения» и отсасывания сыворотки сгусток растирают в пробирке стеклянной палочкой и вносят в среду накопления в соотношении 1:10. После посева крови или сгустков крови и инкубации в термостате (12-18 час) ежедневно в течение 3 дней делают высев на плотные среды. При отрицательных результатах высевы повторяют еще на 6-е и 10-е сутки.

Мочу после центрифугирования или без него засевают в среды накопления двойной концентрации в соотношении 1:1.

Посев другого материала осуществляют общепринятыми в бактериологии методами. Посевы инкубируют при температуре 37° С на плотных питательных средах в течение 18-24 часов (48 часов на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 часов (кроме крови). Посевы для выделения иерсиний инкубируют при 25-26° С. Чашки с посевами на эти микроорганизмы просматривают через 18-20 часов и повторно на вторые сутки термостатирования.

Характеристика колоний энтеробактерий на плотных селективно –дифференциальных средах представлена в таблице 2. Более подробная характеристика колоний энтеробактерий определенных родов изложена в соответствующих разделах.

Колонии, полученные на селективно-дифференциальных средах и характерные для энтеробактерий, отсевают на питательные среды для получения чистых культур, которые используют для родовой дифференциации энтеробактерий.

Таблица 1 - Питательные среды, рекомендуемые для

Первичного выделения энтеробактерий

Исследуемый материал

Энтеробактерии, которые могут содержаться в исследуемом материале

Плотные (селективные) среды

Жидкие (среды накопления)

Плоскирева

Висмут-сульфит агар

Левина

Эндо

Мак-Копки

Минка