Иммунофлуоресцентный метод (прямой и непрямой). Сущность, преимущ-ва, недост-ки

Предложил Кунс (1941 г). Для выявл-я микробных Аг в тканях используют меченую диагностич сыв-ку, содержащую АТ к определ видам микробов. Метку производят флюорохромами. Меченую антисыв-ку наносят на мазок. После тщат промывания мазка на нем остаются только АТ, связавшиеся с Аг, кот-е дают характерное свечение при люминесцентной микроскопии (прямой метод). Более доступен непрямой метод Кунса, т.к. требуется лишь 1 флюоресцирующая сыв-ка – антиглобулиновая (содержит АТ против кроличьих глобулинов, т.к.большинство диагностич сыв-к готовится путём иммунизации кроликов). При образ-и комплекса Аг-АТ флюоресцирующие антиглобулиновые АТ фиксир-ся на нём. Это метод экспресс-диагностики. Преимущ-во – при непрямом методе нужна 1 антисыв-ка. Недостаток – при прямом методе нужно много разных антисыв-к.

Р-я пассивной гемагглютинации, мех-м, применение.

РПГА – АТ агглютинирует Аг, предварительно адсорбированный на разл субстратах (эритроциты жив-х, порошок целлюлозы, бентонита). Иногда применяют обратный вариант - адсорбируют АТ на эритроцитах. Высоко чувствительна и специфична. Прим-ся в серодиагн-ке инфекц б-ней, установления берем-ти, выявл-я ↑ чувств-ти к лекарствам.

Агглютинины и РА. О- и Н-агглютинация бактерий. Мех-м РА. Получ-е агглютинирующих сыв-к.

Развёрнутая РА – это склеив-е и выпад-е в осадок корпускулярных Аг: бактерий, эритроцитов с адсорбированными на них Аг под влиянием АТ в электролите (NaCl). В р-и 2 фазы: I фаза – специфич адсорбция АТ (агглютининов) на поверхности клетки, несущей соответствующие Аг (агглютиногены); II фаза – образ-е агглютината и выпад-е его в осадок в электролите. Мех-м р-и: 1-й акт/центр 2- валентного АТ соедин-ся с детерминантной группой 1-го Аг, а 2-й акт/центр – с другим Аг. Образ-ся агглютинат. Для постановки р-и используют корпускулярные Аг (суспензии бактерий, эритроцитов). Хар-р и быстрота р-и зависят от Аг-строения бактер клетки. Мелкозернистую О-агглютинацию дают бактерии без жгутиков, р-я идёт медленно. Н-Аг даёт крупный осадок и быстрее. Повысить чувств-ть р-и можно путём развед-я исслед сыв-ки до её титра. Титр сыв-ки – это её максим развед-е, в кот-м ещё обнаруж-ся агглютинация Аг. Чем выше титр АТ, тем достовернее рез-ты.

Преципитирующие св-ва иммунных сыв-к. Использ-е преципитации в агаре, примен-е для изуч-я Аг и определ-я токсигенности дифтер палочки.

Иммуносорбентные р-и – р я преципитации и р-я флоккуляции. При взаимод-и Аг с АТ образ-ся видимый осадок (преципитат) или общее помутнение среды. Р-и преципитации ставят в спец узких пробирках. При постановке р-и разводят не сыв-ку, а Аг. Реакционная среда должна содержать электролиты и иметь нейтральный pH. Р-я чувствительная, происходит быстро.

Р-я преципитации – осажд-е Аг, находящегося в коллоидном состоянии, в электролите. Прим-ся в лаборат практике для диагн-ки сиб/язвы (р-я Асколи), туляремии, в суд медицине для опред-я вида белка (кровь, сперма). С помощью этой р-и определяют фальсификацию рыбных и мясных изделий.

Р-я флоккуляции – токсин + антитоксич сыв-ка => помутн-е и рыхлый осадок (флоккулят). Мех-м тот же. Прим-ют при титров-и противодифтер сыв-ки. При опред-и токсигенности дифтер палочки используют тест иммунодиффузии Илека – в чашку вносят полоску бумаги, пропитанную антитоксином, по обе стороны засевают культуры. В месте встречной диффузии токсина и антитоксина образ-ся преципитат.

Литич св-ва иммунн сыв-к. Роль комплемента, мех-м взаимод-я комплемента с комплексом Аг-АТ.

Иммунные сыв-ки обеспеч-ют пассивную невоспр-ть к возбуд-лям инфекц б-ней. Действующее начало – специфич АТ, обладают эффекторным (разруш-е) д-ем. Используют для профил-ки и леч-я инфекций. АТ сывороточных препаратов проявляют агглютинирующий, преципитирующий, комплементсвязывающий, нейтрализующий эффекты. Вводят парентерально, состояние невоспри-ти развив-ся быстро и длится 2-6 нед.

Комплемент – это система белковых фракций сыв-ки крови, способная вызывать лизис микробов. Комплемент - термолаб фактор естеств иммунитета. В активном состоянии участвует в иммунологич р-ях, адсорбируясь на комплексе Аг-АТ. При этом вызывает лизис клеток – Аг, ↑ фагоцитоз, участвует в РН вирусов, в анафилаксии. Комплемент содержит 9 фракций белков (С₁…С₉), они неактивны.

Вакцины, виды, пригот-е, примен-е. Токсины и анатоксины. Отеч вакцины.

Вакцины – привив препараты, получают из микробов, их Аг и токсинов. Прим-ют с профилактич и леч целью. Впервые вакцинацию провёл Дженнер в 1796 г против оспы (взял от коровы и ввёл мальчику).

Вакцины готовят из спец штаммов микробов, их выращ-ют на спец среде, в особых условиях. Выпускают в виде лиофилизиров препаратов (высушенных из замороженного состояния в вакууме).

Вакцины делят на:

1) Живые – впервые применил Дженнер. Имеют слабую вирулентность и хорошую иммуногенность. Пастер получил вакцину против бешенства, tbc, туляремии, чумы, сиб/язвы. В нашей стране созданавакцина против полиомиелита. Живые вакцины создают более напряжённый иммунитет, т.к. воспроизводят лёгкий инфекц процесс. Оспу ликвидировали к 1979 г.

2) Убитые – суспензия убитых микробов в NaCl. Это – вакцины против бр/тифа, паратифа, холеры, коклюша, гриппа, энцефалита.

3) Химические – готовят из отдельных Аг микробов. Против бр/тифа, паратифа, сиб/язвы.

4) Анатоксины – используют для профил-ки дифтерии, столбняка, ботулизма, газ/гангрены. Направлены на нейтрализацию токсинов.

Анатоксин – «обратный» токсин. Ядовитость экзотоксинов определ-ся наличием акт/центра (из аминок-т). Блокиров-е акт/центра приводит к утрате токсичности, но сохран-ся биологически акт/центр, отвечающий за Аг-ные и иммуногенные св-ва. Так получают анатоксины (обраб-ют исходный токсин формалином). Цель их применения – индукция иммунных р-й, направленных на нейтрализ-ю токсинов; в рез-те иммунизации синтез-ся нейтрализующие АТ (антитоксины). Иммунитет при дифтерии, столбняке, ботулизме имеет антитоксич хар-р (направлен на обезвреж-е бактер токсинов).

ВИРУСОЛОГИЯ ОБЩАЯ