2020-07-12
310
Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с нанесенными на него поперечными прорезами, образующими три площадки. На средней площадке выгравирована сетка.
Счетную камеру осторожно протирают спиртом-эфиром и высушивают. Сетку покрывают шлифованным покровным стеклом и притирают его к двум боковым площадкам до появления на них радужных колец (ньютоновых колец).
Меланжер (смеситель) представляет собой стеклянную трубку (капилляр) с ампулообразным расширением, внутри которого помещен подвижный стеклянный шарик для смешивания спермы с раствором. Смеситель обрабатывают смесью спирт-эфира и высушивают, продувая при помощи резиновых шаров.
Для спермы быка и барана применяют эритроцитарный смеситель (меланжер с красным шариком), для спермы хряка и жеребца -лейкоцитарный (с белым шариком). Эритроцитарный меланжер позволяет разбавлять сперму в 100 и 200 раз. На меланжере имеются деления (метки): 0,5; 1,0; 101. Лейкоцитарным меланжером сперму разбавляют в 10-20 раз, на нем имеются деления (метки): 0,5; 1,0; 11.
Вмеланжер набирают сперму быка до метки 1,0, сперму барана, хряка, жеребца -до метки 0,5, а затем разбавляют 3% раствором хлористого натрия или дистиллированной водой -до верхней метки -101 или 11. Сперма быков разбавляется в 100 раз,
1 2
3
Рис. 51. Подготовка и заполнение камеры для определения концентрации спермы: 1 -притирают покровное стекло; 2 -размешивают сперму с 3-% раствором хлористого натрия; 3 -наносят каплю разбавленной спермы на сетку камеры под покровное стекло. 140
барана -в 200, хряка, жеребца -в 20 раз. Затем в вертикальном положении делают осторожные покачивающие вращательные движения смесителя в течение 2-3 минут до полного смешивания спермы с раствором и гибели спермиев.
Из капилляра меланжера удаляют первые 2-3 капли (где нет спермиев), а последующую каплю наносят на среднюю часть камеры у самого верхнего края притертого -стекла, под которым образовалась микроскопическая капиллярная щель, через которую и заполняют камеру. Глубина этой щели указана на самой камере -0,1 м. Камеру помещают на столик микроскопа таким образом, чтобы в поле зрения микроскопа помещался левый верхний большой квадрат, разделенный на 16 малых. Число спермиев подсчитывают в 5 больших (80 малых) квадратах по диагонали. Считают головки спермиев, которые лежат внутри малых квадратов, а также на левых и верхних линиях этого квадрата. Для более полного подсчета спермиев, расположенных в глубине камеры, производят постоянное вращение микровинтом.
Подсчет спермиев проводят не менее двух раз в двух разных камерах при условии взятии пробы из одного меланжера. Если при подсчете спермиев разница результатов будет превышать 10%,то проводят подсчет дополнительно.
Концентрацию спермиев в одном миллилитре определяют по формуле:
где П -число сосчитанных спермиев,
Д-степень разбавления,
Н-число сосчитанных малых квадратов (80),
Р-глубина камеры,
400 -множитель введен в формулу для перевода подсчитанных спермиев в 1 кв. мм, 1000000 -введен в знаменатель для получения результата в млрд. в 1мл.
Если произвести замену обозначений известными величинами и произвести допустимые сокращения, то конечный результат формулы для определения концентрации спермиев у быков будет равняться:
У барана 141
У жеребцов и хряков
После окончания работы счетную камеру, шлифованное покровное стекло, меланжеры промывают дистиллированной водой, затем спирт-эфиром и высушивают, продувая через смеситель воздух резиновой грушей.
Определение концентрации спермиев по стандартам
Определение концентрации спермиев жеребца проводят по стандартам, разработанным Всесоюзным научно-исследовательским институтом коневодства (Г.В. Паршутин, Е.В. Румянцева).
Стандарты представляют собой стеклянные запаянные пробирки одинакового диаметра с жидкостью, имитирующей сперму жеребца различной концентрации: 10-50-100-200-300-500 млн. спермиев в 1 мл спермы.
Определяют концентрацию спермиев следующим образом; сперму наливают в прилагаемую пустую пробирку такого же диаметра и сравнивают со стандартами. Предварительно стандарты встряхивают, чтобы равномерно размещался осадок. Пробирки просматривают на свет, при этом подбирают стандарт, наиболее близкий по густоте к определяемой сперме, который и принимают за ее концентрацию. Концентрация спермиев может быть определена как промежуточная между двумя стандартами, например, 75 млн. (между 50 и 100 млн.) и т.д. Для большей
Рис. 52. Биотермостат.142
точности определения к сравниваемым пробиркам сзади вплотную прикладывают стеклянную палочку.
При концентрации более 500 млн. спермиев в 1 мл сперму можно разбавить 7%-ным раствором глюкозы в 2 раза (1:1) и затем установить концентрацию по стандартам и сделать пересчет на неразбавленную сперму.
Определение концентрации спермиев с помощью
Фотоэлектроколориметра (ФЭК - М)
ВФЭКвмонтированы селеновые элементы и гальванометр. При пропускании через кюветы со спермой пучка лучей определенной силы света они падают на селеновый элемент и отклоняют стрелку гальванометра. Степень отклонения гальванометра зависит от величины электрического тока: она обратно пропорциональна мутности спермы, концентрации спермиев. Величина ослабления света регистрируется чувствительными фотоэлементами.
Фотоэлектрокалориметр позволяет легко и очень быстро, в течении 1-2 минут, определить концентрацию спермиев в эякуляте почти с такой же точностью, как и в счетных камерах Горяева, работа с которыми требует значительных затрат времени и труда.
Калибровочную кривую строят для каждого прибора. Всвязи с тем, что показания прибора могут изменяться от старения фотоэлементов и радиоламп или других причин, калибровочную кривую строят каждый месяц к данному прибору.
