2020-07-12
505
Впроцессе сперматогенеза спермии приобретают сравнительно плотную оболочку, придающую им определенную, постоянную форму. Проходя по длинному каналу придатка семенника (45-75м), спермин покрываются особой липопротеидной оболочкой, которая наслаивается поверх кератиновой оболочки наподобие тончайшей пленки. Чем устойчивее этот липопротеиновый покров, тем более жизнеспособны спермии, тем лучшего качества сперма, тем выше оплодотворяющая способность ее.
Резистентность -это устойчивость спермы при разбавлении ее 1% раствором хлористого натрия. 148
Методика определения резистентности состоит в отыскании степени разбавления спермы 1% раствором хлористого натра, убивающим спермиев, обладая растворяющим действием на липопротеиновый покров. Чем менее устойчивы спермии, тем более сильное действие оказывает на них этот раствор (особенно ионы хлора), вызывая набухание и разрушение липопротеинового покрова. Спермии, лишенные этого покрова, теряют подвижность и погибают.
Резистентность спермиев выражается числом миллилитров этого раствора, который необходимо прибавить к 1 мл спермы, для того, чтобы прекратить прямолинейно-поступательное движение спермиев. Резистентность вычисляют по формуле:
где V -объем прилитого раствора хлористого натрия, мл;
v -количество взятой спермы, мл.
Показатели резистентности спермы:
баран 5000 -20000
бык 3000 -10000
жеребец 500 -1500
хряк 1000 -3000.
Определение резистентности спермы проводят по методу В.К. Миловнова и ускоренным по А.И. Короткову или И.В. Смирнову и В.И. Поставной. Резистентность определяется как неразбавленной, так и разбавленной спермой.
Оценка спермы по времени обесцвечивания спермиями
Метиленовой синьки или по интенсивности их дыхания
(по Н.И.Шергину)
Воснове метода лежит способность метиленовой синьки соединяться с водородом, который выделяется в результате биохимических реакций, протекающих в сперме. Присоединяя два атома водорода, метиленовая синька переходит в восстановленную форму -лейкометиленовую синьку и при этом обесцвечивается. Этот процесс протекает с участием ферментов-дегидрогеназ.
Этим методом определяют интенсивность наиболее важного жизненного процесса спермиев быка и барана -дыхания.
Обесцвечивание метиленовой синьки связывают с интенсивностью дыхания спермиев. Спермии для своего дыхания потреб 149
ляют растворенный в смеси спермы и метиленовой синьки кислород, и синька при отсутствии кислорода обесцвечивается. Продолжительность обесцвечивания синьки зависит от концентрации спермиев: чем большее количество их обладает способностью к прямолинейно-поступательному движению, тем интенсивнее их дыхание и интенсивнее идет поглощение кислорода, тем быстрее происходит обесцвечивание метиленовой синьки. Аэто, в свою очередь, свидетельствует о лучшем качестве спермы: высокой выживаемости и оплодотворяющей способности их.
Оценку неразбавленной спермы производят при температуре +20°С. На предметное стекло наносят пипеткой 1-2 капли 0,01%-ного раствора метиленовой синьки, затем такое же количество спермы. Капли смешивают стеклянной трубочкой, и погрузив кончик ее в смесь, насасывают окрашенную сперму, чтобы в канале трубки получился окрашенный столбик длиной около 2 см. Важно, чтобы жидкость не пенилась и в столбике не было пузырьков воздуха.
Трубку со столбиком спермы кладут на белую бумагу и замечают по часам время, в течение которого голубой столбик обесцвечивается. Сперма не обесцвечивается только на концах, где она соприкасается с воздухом.
По времени обесцвечивания определяют качество спермы быка и барана.
Определение абсолютного показателя живучести спермиев
Для определения живучести спермиев у быка и барана берут 11 пробирок и нумеруют их. В10 пробирок, начиная со второй пробирки, наливают 0,5 мл разбавителя. Затем в 1 и 2 пробирки добавляют по 0,5 мл полученной спермы. После перемешивания спермы с разбавителем 0,5 мл смеси из второй пробирки переносят в третью, из нее столько же в четвертую и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл разбавленной спермы выливают. Неразбавленная сперма в первой пробирке будет служить контролем. Таким образом, во 150
второй пробирке сперма разбавлена в 2 раза, в следующей в 4, затем 16, 32 и т.д. Впоследней 11-й в 1024 раза. После проверки активности спермы пробирки ставят в термос со льдом. Ежедневно сперму проверяют на активность при +40°С. Эти исследования проводят до тех пор, пока спермин не прекратят движения во всех пробирках.
Для вычисления абсолютного показателя живучести спермиев используют формулу:
S = Σ a • t
где S -абсолютный показатель живучести спермиев,
Σ − знак суммы;
а -активность в баллах.
t -показатель времени, вычисляемый по формуле:
где Тп + 1 -время в часах от начала исследования до последующего определения подвижности спермиев,
Тп -1-время в часах от начала опыта до предыдущего определения подвижности.
Абсолютный показатель живучести спермиев быка и барана при разбавлении спермы в 16-32 раза должен быть не ниже 1400; сперма хряка не ниже 900, жеребца -не ниже 400.
Определение бактериальной загрязненности спермы
Исследуемую сперму разбавляют стерильным физиологическим раствором в соответствии 1:10, потом делают серию разведении спермы 1:100, 1:1000, 1:10000 и т.д. По одному миллилитру из каждого разбавления высевают на стерильные чашки Петри, заливают их расплавленным и охлажденным до +45 градусов мясопептонным агаром. Все пробы необходимо дублировать (по две чашки каждое разведение).
Посевы ставят в термостат при температуре +37 градусов Сна 24 часа. Количество микробных тел в 1 мл исследуемой спермы вычисляют по формуле: 151
Физиологический раствор, применяемый для разбавления проб спермы, питательная среда и чашки Петри должны проверяться на стерильность.
Взависимости от содержания микробов различают сперму: незначительно загрязненную -при содержании в 1 мл спермы до 0,1 тыс. микробов, слабо загрязненную до 2 тыс. микробов в 1 мл средне загрязненную более 5 тыс. микробов в 1 мл.
Допускают сперму с содержанием не более 5 тыс. микробов в 1 мл.
