2014-10-30
8373
Для определения резус-фактора может быть использована свежая не свернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием, или консервированная, без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.
Техника определения.
- 1мл стандартного универсального реагента (антирезусная сыворотка группы AB(IV)+33% раствор полиглюкина);
-1мл исследуемой крови(эритроцитов)
На дно пробирки внести 1 каплю стандартного универсального реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов).
Содержимое пробирки перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по её стенкам. после 3-минутного покачивания,
для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавить 2-3мл физиологического раствора хлористого натрия и перемешать, не взбалтывая, путём 2-3-х кратного перевёртывания пробирки. Оценку производить визуально.
Оценка результата.
Резус-(+) -наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветлённой жидкости.
Резус-(-) -отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость).
Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти-d, анти-d супер).
Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде
Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.
Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом.
Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек.
Результаты реакции считывают через 3 мин.
Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.
Метод агглютинации на чашках Петри.
- исследуемые эритроциты;
-две серии стандартных сывороток антирезус всех групп системы АВО;
-контрольные образцы резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов:
-водяная баня с постоянной температурой 46-48 С°
-чашки Петри
В чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева - одной серии, справа - другой в 3 ряда для 3 исследований. В каждую серию прибавляют по 1капле эритроцитов (1.исследуемые, 2.контрольные Rh-положительные и 3.контрольные Rh-отрицательные). После смешивания (стеклянными палочками) сывороток в каждой точке с добавленными эритроцитами чашку помещают в водяную баню при t° 46—48° на 7—10 мин, после чего рассматривают в проходящем свете.
Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее - об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.
Метод агглютинации с 10% желатином:
Реакция конглютинации с желатиной обычно проводится в пробирках емкостью 8—10 мл. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок для двух различных серий стандартной сыворотки. В контрольные пробирки каждого ряда вводят по 1 капле стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов, в остальные пары пробирок — исследуемые эритроциты. Исследование можно проводить как с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами.
Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле подогретой до разжижения желатины (10% раствор) и по одной капле стандартной сыворотки. Содержимое пробирок смешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при t° 46—48° на 5 мин., по истечении которых в каждую пробирку доливают 5—8 мл подогретого до t° 46—48° физиологического раствора NaCl и рассматривают на свет, определяя наличие или отсутствие агглютинации (рис. 2).
Метод агглютинации в солевой среде.
При исследовании сывороткой, содержащей полные антитела, применяют метод агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см, диаметром 0,5 — 0,6 см).
В штатив устанавливают 2 ряда пробирок (по количеству исследуемых образцов и по 2 для контроля), в которые вводится по 2 капли стандартной сыворотки и по 1 капле 2% взвеси эритроцитов, предварительно дважды отмытых физиологическим раствором NaCl.
Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час.
О резус-принадлежности судят по форме осадка, который рассматривают через лупу с 5—7-кратным увеличением над источником света, закрытым матовым стеклом. Результаты учитывают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации в исследуемых эритроцитах после проверки контрольных образцов.
