Вопрос 3 Фармхимия

Рибофлавин (МНН). Riboflavinum

Витамин В₂

1. Рибофлавин восполняет недостаток витамина Вг в организме. Особенно он важен для нормальной функции зрения. Назначают внутрь в таблетках и драже по 0,005-0,01 г и глазных каплях (0,01% раствор) при гипо- и авитаминозе, различных глазных заболеваниях, длительно незаживающих ранах и язвах, лучевой болезни, болезни Боткина и т.д.

Рибофлавин является производным изоаллоксазина, который включает пиримидин, пиразин и бензол:

Изоаллоксазиновый цикл в молекуле рибофлавина связан с остатком ри-битола.

Рибофлавин имеет характерную желто-оранжевую окраску, обусловленную несколькими сопряженными связями в молекуле. Рибофлавин имеет слабый специфический запах и горький вкус. Он мало растворим в воде, нерастворим в этиловом спирте, эфире, ацетоне, хлороформе. Растворим в растворах гидроксидов щелочных металлов и кислот, т.к. является амфотерным соединением. Его кислотные свойства обусловлены наличием подвижного атома водорода имидной группы, а основные — наличием нескольких гетероциклических атомов азота.

Нейтральные водные растворы рибофлавина имеют яркую зеленовато-жёлтую окраску, вследствие чего становится возможным для проведения ана­лиза использование спектро- и фотометрических методов.

Рибофлавин оптически активен. Оптическая активность рибофлавина обусловлена наличием в рибитильной цепочке трёх асимметричных атомов угле­рода. Поэтому ГФ рекомендует в качестве константы, характеризующей подлин­ность и чистоту, определять удельное вращение щелочного раствора (определен­ной концентрации) рибофлавина, которое должно быть от -115 до -135°.

Рибофлавин можно идентифицировать по ИК-спектру, который должен соответствовать спектру его стандартного образца или спектру сравнения.

2. Проявление витаминной активности во флавиновой системе связано с наличием в молекуле чрезвычайно лабильной азадиеновой группировки. Эта группировка обусловливает окислительно-восстановительные свойства рибофлавина.

При восстановлении рибофлавин, теряя желтую окраску, переходит в бесцветный лейкорибофлавин. Последующее окисление обусловливает обратный процесс:

Рибофлавин устойчив к окислителям и нагреванию, но при нагревании в очных растворах рибофлавин быстро разрушается. Под влиянием света не устойчив он и в кислой, и щелочной средах. Например, под действием света рибофлавин в щелочной среде образует люмифлавин, а в нейтральной и слабой — люмихром, в этом случае физиологическая активность рибофлавина исчезает:

Люмифлавин в растворах имеет окрашивание и флуоресценцию, аналогичные рибофлавину, но отличается от него тем, что растворяется в хлороформе. Это свойство используют для обнаружения примеси люмифлавина в рибофлавине.

Для испытаний производных изоаллоксазина используют химические реакции, основанные на окислительно-восстановительных свойствах сопряженных двойных связей, окислении, комплексообразовании аминогруппы.

Подлинность рибофлавина устанавливают по характерной яркой зеленова-желтой окраске и интенсивной зеленой флуоресценции водного раствора (в УФ излучении), которая обусловлена наличием в молекуле свободной иминной группы в положении 3 изоаллоксазинового цикла. Флуоресценция исчезает при добавлении растворов кислоты хлористоводородной или щёлочи. Если к водному раствору рибофлавина прибавить натрия гидросульфит (сильный восстановитель), то окраска и флуоресценция исчезают вследствие образования лейкорибофлавина. Свойство флуоресцировать используют для флуориметрического определения рибофлавина.

Как азотсодержащее органическое основание, рибофлавин дает положительную реакцию с реактивом Драгендорфа и другими общеалкалоидными (осадительными) реактивами. С солями металлов (серебра, кобальта, меди, ртути и др.) рибофлавин образует нерастворимые окрашенные комплексные соединения. Эти реакции используют для фотоколориметрического определения рибофлавина в лекарственных формах.

Для количественного определения рибофлавина в настоящее время используются в основном биологические и физико-химические методы: флуориметрический, колориметрический и спектрофотометрический.

Для качественного и количественного анализа применяют спектрофото-метрию в УФ-области. Все испытания выполняют, защищая испытуемое лекарственное вещество от попадания прямого солнечного света. В водных растворах рибофлавин имеет 4 максимума поглощения. Количественное содержание рассчитывают по удельному показателю поглощения рибофлавина.

Способы количественного определения титриметрическими методами основаны на использовании кислотно-основных и окислительно-восстановительных свойств.

Для количественного определения применяют алкалиметрическое определение рибофлавина после его реакции с серебра нитратом, а также цериметрию и метод Кьельдаля.

Рибофлавин необходимо хранить в хорошо укупоренных банках оранжевого стекла, учитывая его свойство легко окисляться и разлагаться под действием света с образованием биологически неактивных люмихрома и люмифлавина.

В рибофлавине устанавливают допустимое содержание примеси лю-мифлавина путем извлечения его хлороформом. Затем измеряют его оптическую плотность относительно хлороформа при длине волны 440 нм.

Растворы, приготовленные для количественного спектрофотометрического определения, используют для установления в рибофлавине допустимого содержания светопоглощающих примесей. Отношения оптических плотностей растворов рибофлавина, измеренных при определённых длинах волн, должны находиться в интервалах, приведенных в НД.