Выделение чистой культуры аэробов, методы идентификации. Культивирование анаэробов

Цель занятия: выделение чистой культуры стафилококка, знакомство с методами идентификации; освоение методов культивирования анаэробов, приготовления специальных питательных сред; выделение чистых культур анаэробов.

Основные вопросы темы

1. Этапы выделения чистой культуры аэробов и ее идентификации.

2. Анаэробные микроорганизмы. Способы создания их условий культивирования.

3. Питательные среды для культивирования анаэробов. Принципы выделения чистых культур.

Блок дополнительной информации.

1. Выделение чистой культуры аэробов и ее идентификация.

Получение чистой культуры микроорганизмов происходит в несколько этапов: сначала производят механическое разобщение для посева исследуемого материала на питательную среду. При посеве необходимо получить рост отдельных колоний. При выделении культуры бактерий из зева посев производят тампоном, втирая материал в питательную среду (ЖСА).

В этом конкретном случае для выделения чистой культуры стафилококка используют разобщение микробов и применение элективной питательной среды – желточно-солевого агара Чистовича, на котором вырастают в основном только колонии стафилококков.

Изучают рост колоний (второй день исследования) и делают высев на скошенный МПА. Колония – это потомство одной микробной клетки. У каждого вида бактерий колонии обладают характерными признаками. Учитывают размеры колоний, их число, форму, характер края, поверхность, структуру, прозрачность, наличие пигмента, выделение фермента патогенности – лецитовителлазы (расщепление лецитина питательной среды до диглицерида, который дает образование ореола вокруг колоний). Например, колонии патогенного стафилококка могут быть круглые выпуклые, с ровным краем, гладкой поверхностью, имеют золотисто-желтый пигмент, выделяют лецитовителлазу.

Для идентификации культуры применяют методы: изучение морфологии при окраске по Грамму; определение биохимических свойств бактерий (спектр расщепления углеводов по средам Гисса); выявление образования ферментов патогенности, токсинов и антигенной структуры по реакциям со специфической иммунной сывороткой; определение чувствительности культуры к антибиотикам.