Питательные среды для бактероидов

Кровяной анаэробный бактоагар с канамицином и желчью

эритрит-агар – 36,0 г

крахмал растворимый – 1,0 г

аммоний сернокислый – 0,4 г

натрий углекислый кислый – 1,0 г

гемин (1% раствор) – 1 мл

твин-80 – 1 мл

вода дистиллированная – 1000 мл

дрожжевой экстракт – 5, 0 г

желчь сухая – 20, 0 г

Компоненты растворить при нагревании, установить рН 7,2, профильтровать через ватный тампон, разлить во флаконы, автоклавировать при 1 атм. 20 минут.

Перед употреблением среду растопить, охладить до 50^оС, добавить 5% лизированной двукратным замораживанием и оттаиванием цитратной крови донора и витамин К₁ из расчета 0,1 мл 1% раствора на 100мл среды, и канамицин из расчета 1 мг/мл (бактероиды обладают природной устойчивостью к аминогликозидам и желчи). Перемешать, разлить в чашки Петри. После застывания подсушить 10-15 мин.

Свежеразлитую (в течение 2 ч после приготовления) или прередуцированную, т.е. выдержанную в течение суток в анаэростате, среду используют для первичного выделения бактероидов группы B.fragilis, субкультивирования, определения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Среда для бактероидов Хенеля-NH – неомицин-агар

Среда NH –основная

Пептон – 10, 0г

Натрия хлорид – 3, 0 г

Na2HPO4*2H2O – 2, 0г

Мясной экстракт – 3, 0 (30, 0 мл мясной воды)

Дрожжевой экстракт – 4, 0 г (40 мл)

Декстроза – 6, 0 г

Агар-агар – 20, 0 г

Твин-80 – 1, 0 мл

Цистин – 0, 25 г

Дистиллированная вода –до 1000 мл

рН 6, 8 – 7, 0

стерилизация 0, 5 атм.30 минут.

Перед розливом в чашки к основному агару добавляют неомицина или неовитина – 0, 08 г, дезоксихолата натрия – 0, 2г, крови 30 мл или эритроцитарной массы – 20 мл.

Обогащенная питательная среда для контроля стерильности с канамицином и желчью.

Канамицин добавить в среду из расчета 1 мг/мл. для этого 1 г канамицина растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Весь объем раствора канамицина и 20 г сухой желчи добавляют к 1 л среды до стерилизации.

Среда может быть использована для селективного выделения бактероидов группы B.fragilis/

Кровяной агар для бактероидов (КАБ)

Цитратная кровь человека – 7% (70 мл)

Дрожжевой аутолизат – 6% (60 мл)

Глюкоза – 0, 6% (6, 0 г)

Na2HPO4*2H2O – 0, 2% (2, 0г)

Твин -80 – 0, 1% (1 мл)

Na2SO3 – 0, 05% (0, 5 г)

Тиогликолевая кислота – 0, 04% (0, 4 мл)

Цистеин – 0, 025% (250 мг)

МПА расплавленный – 86% (869 мл)

Среду готовят на мясо-пептонном агаре (МПА). 2 г Na2HPO4*2H2O и 1 г твина-80 растворяют при подогревании в 60 мл дрожжевого аутолизата. После фильтрации добавляют смесь к 860 мл МПА. Стерилизуют при 0, 5 атм. 20 минут

После фильтрации добавляют 250 мг цистеина, 0, 04 мл тиогликолевой кислоты и 6 г глюкозы. Устанавливают рН 7, 0, разливают в проьирки по 10 мл. стерилизуют при 0, 5 атм.20 минут. Перед посевлом среду расплавляют на водяной бане, и после охлаждения (до 60°С) прибавляют в каждую пробирку по 0, 2 мл 2, 5% раствора Na2SO3 9приготовленный заранее на стерильной дистиллированной воде) и 0, 7 мл цитратной крови человека (без анотибиотиков).

Питательная среда для контроля стерильности готовится по прописи.