Определение содержания 5-ГМФ

При анализе образцов меда растворы готовили следующим образом:

1г исследуемого меда (точная навеска) растворяли в 50 мл воды для ВЭЖХ. Раствор перемешивали до полного растворения меда в УЗ – ванне при комнатной температуре в режиме «перемешивание». Затем раствор фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 микрон. Фильтрат анализировали методом ВЭЖХ.

Условия анализа:

- рабочая длина волны 5-ГМФ была определена по УФ-спектру и составила

284 нм;

- для повышения эффективности разделения применялся градиентный режим элюирования:

0 – 7 мин. – вода: ацетонитрил (97: 3 об.);

7 – 12 мин. – вода: ацетонитрил (0: 100 об.);

12 – 17 мин. - вода: ацетонитрил (97: 3 об.);

- объемная скорость элюирования составляла 1,0 мл/мин.;

- объем инжекции 20 мкл;

- температура термостата колонки 30°С;

Состав фазы может варьироваться для достижения оптимального разделения.
4.3. Определение содержания САР (Chloramphenicolum).

Комбинация твердофазной и жидкостной экстракции.

Для максимально эффективной экстракции САР и удаления полифенольной части было решено совместить предыдущие варианты экстракции.

Навеску меда 3г помещали в полипропиленовую тубу для центрифугирования. Растворяли в 10 мл воды для ВЭЖХ. К раствору добавляли 20 мл этилацетата. Встряхивали на механической мешалке типа Vortex. Тубу помещали в центрифугу на 10 минут при 10000 об/мин. Органическую фазу отбирали и упаривали досуха на роторном испарителе при комнатной температуре в грушевидной колбе. Полученный осадок перерастворяли в 30 мл воды.

Данная процедура позволяет освободиться от полифенольной части меда, которая в воде практически не растворяется. Раствор переносили в тубу для центрифугирования. Грушевидную колбу ополаскивали 5 мл гексана. Смыв добавляли в тубу с водным раствором. Энергично встряхивали тубу и помещали ее в центрифугу на 10 мин при 10000 об/мин. Органический слой удаляли. Водную фазу пропускали через картридж для твердофазной экстракции Varian Bond Elute C18 со скоростью 2 капли в секунду. Жидкость удаляли, картридж промывали 1 мл воды, затем еще 2 мл воды. Смыв также удаляли.

Картридж просушивали под вакуумом. В чистую пробирку с картриджа делали смыв 4 мл МеОН. Растворитель упаривали досуха под струей чистого воздуха. Осадок перерастворяли в 1 мл 3% уксусной кислоты.

Анализ проводили по следующим схемам:

Градиент 2: 0-10 мин 25% ACN, 10,5-15 мин 100% ACN, 15,5-20 мин 25% ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 4,94.

Градиент 3: 0-10 мин 2% ACN, 10,5-12 мин 25% ACN, 12-20 мин 25% ACN,

20,5-21 мин 90% ACN, 21-25 мин 90% ACN, 25,5-30 мин 2% ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 17,1.

Градиент 4: 0-10 мин 2% ACN, 10,5-18 мин 25% ACN, 18-26 мин 25% ACN,

26,5-27 мин 90% ACN, 27,5-32 мин 90% ACN, 32,5-37 мин 2%

ACN, 5 мин промывка после анализа. Время удерживания 21,2.
5. Результаты проведенных исследований.