2015-04-23
477
Отсортированные клетки сохраняют жизнеспособность и функциональные свойства, что позволяет их длительно культивировать и исследовать in vivo, а также использовать для клинической трансплантации. Метод позволяет идентифицировать минорные популяции клеток, что важно, например, для выделения стволовых клеток. Клеточный сортер имеет широкий спектр приложений в биологии и медицине и незаменим для решения таких задач, как анализ переноса энергии флюоресцентного резонанса, работа с флюоресценцией протеинов, исследование органелл, антигенов, рецепторов, апоптоза, потока кальция, мембранного потенциала, молекулярных механизмов передачи сигнала, а также для сортировки стволовых клеток, спермы и других минорных популяций.
Сортировка стволовых клеток. Одна из наиболее значимых областей для использования клеточного сортера — биология стволовых клеток и их применение в клинической трансплантологии. Так, при получении из крови стволовых кроветворных клеток для последующей трансплантации их количество составляет по разным оценкам от 0,01% до 1% лейкоцитов. Для решения сложной задачи выделения этих клеток используют высокоэффективную сортировку на основе мультипараметрического иммунофенотипирования, т.е. осуществляют отбор клеток не по одному, а по нескольким признакам одновременно. В этом направлении в настоящее время проводятся активные исследования стволовых клеток с целью уточнения мембранных маркёров, морфо-функциональных характеристик и способности клеток приживляться в организме реципиента.
Молекулярные методы исследования
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ БЕЛКА
Иммуноблот
С помощью иммуноблота (вестерн-блот, Western blot) выполняют качественный и количественный анализ белков-мишеней. Принцип метода основан на специфическом взаимодействии первичных АТ с искомым белком. Денатурированный белковый экстракт из исследуемого образца разделяют с помощью электрофореза в градиентном (4–16%) додецилсульфат натрия–полиакриламидном геле (SDS–PAGE). Разделённые по молекулярной массе белки путём электрофореза из геля переносят на микропористую нитроцеллюлозную мембрану (блотинг). После чего белки-мишени выявляют с помощью специфических АТ непрямым иммунопероксидазным методом.
