Нуклеопротеины

Нуклеопротеины (НП) состоят из белков и нуклеиновых кислот. Белковая часть НП представлена гистонами, содержащими большое количество основных аминокислот. Существует 2 типа НП, отличающихся по составу, размерам и физико-химическим свойствам, - дезоксирибонуклеопротеины (ДНП) и рибонуклеопротеины (РНП). В состав РНП входят рибонуклеиновые кислоты (РНК), в состав ДНП - дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК). Структурной единицей нуклеиновых кислот является нуклеотид, включающий азотистое основание, углеводный компонент (рибоза, дезоксирибоза) и фосфорную кислоту. Нуклеопротеины в клетках входят в состав сложно организованных структур – нуклеосом, хроматид, рибосом и т.д. ДНП и РНП участвуют в хранении и передаче потомству генетической информации.

Дезоксирибонуклеопротеины выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами (селезенка, сперматозоиды). ДНП растворяются в растворах солей средней концентрации, например в хлориде натрия (1 М), и снова осаждаются при разведении последних (до 0,15 М) в виде волокнистого нуклеопротеина.

Выделение дезоксирибонуклеопротеинов из селезенки.

В ступке растирают 5 г селезенки с равным количеством песка, добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора хлорида натрия, а затем постепенно небольшими порциями 25 мл охлажденного 1 М раствора хлорида натрия. Растирание продолжают 10-15 мин в ступке, охлаждаемой льдом. Полученную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин. Измеряют объем центрифугата и вливают его в шестикратный объем воды тонкой струей, медленно размешивая жидкость деревянной палочкой. Нуклеопротеин в виде нитей наматывается на палочку.

Если выделился хлопьевидный осадок, то ему дают отстояться, а остаток жидкости подвергают центрифугированию. Осадок после центрифугирования исследуют на содержание в нем ДНК.

Реакция с дифениламином.

Дезоксирибонуклеиновую кислоту обнаруживают по ее реакции с дифениламином, который с дезоксирибозой дает синее окрашивание. Рибонуклеиновая кислота (или рибоза), в отличие от ДНК, дает с этим реактивом зеленое окрашивание.

В пробирку переносят немного осадка ДНК и растворяют его в 1-2 мл 0,4%-ного раствора гидроксида натрия. К раствору добавляют равный объем раствора дифениламина и смесь нагревают в кипящей водяной бане около 10-15 мин.