double arrow

Генотипоскопическая экспертиза


Предметом генотипоскопической экспертизы является установление фактических данных полиморфных генетических признаков ДНК генома человека. Особенность этих признаков заключается в том, что по отдельности они не являются уникальными для конкретного индивидуума, поскольку обычно присущи группе людей. Однако в совокупности они позволяют индивидуализировать объект исследования и решить основную задачу экспертизы - отождествление конкретного человека.

Объектом исследования в генотипоскопической экспертизе являются любые ткани и выделения человека, которые содержат ДНК. К таким тканям и выделениям относятся жидкая кровь и пятна высохшей крови, слюна, сперма, мышечные и костные ткани, корневые концы волос с луковицей и другие объекты.

Основная задача экспертизы - идентифицировать источник происхождения биологических следов от конкретного лица, чьи генетические признаки в процессе исследования сравниваются с генетическими признаками объекта, происхождение которого неизвестно.

Для решения этой задачи, как правило, применяют сравнительное исследование генетических признаков изучаемого объекта и генетических признаков образца крови лица, от которого предполагается происхождение объекта. Такое исследование обычно проводится, когда на месте происшествия обнаруживаются и изымаются следы биологического происхождения человека и имеется лицо или круг лиц, от которых данные следы предположительно происходят. В настоящее время такое сравнение возможно и при отсутствии этих лиц. С момента вступления в силу Федерального закона от 03.12.2008 N 242-ФЗ "О государственной геномной регистрации в Российской Федерации"*(64), в системе МВД России формируются базы данных о ДНК лиц, осужденных за тяжкие и особо тяжкие преступления, все преступления против половой неприкосновенности и половой свободы личности. При сравнении полученного профиля ДНК изучаемого объекта с данными, хранящимися в базе, имеется вероятность установления лица - источника биологического объекта и, соответственно, появляется новая возможность раскрытия преступления.

Генотипоскопическая экспертиза в отличие от любых других экспертиз может решить задачу идентификации объекта, не применяя прямого сравнительного исследования, а проводя сравнение с генетическими признаками ближайших родственников. Подобные исследования очень часто проводятся при идентификации останков неопознанных трупов, которые не могут быть идентифицированы традиционными и антропометрическими методами. В этих случаях задача идентификации может быть решена путем сравнения генетических признаков останков с генетическими признаками предполагаемых родителей или детей погибшего либо генетических признаков митохондриальной ДНК останков с генетическими признаками предполагаемых сестер или братьев, а также родственников по материнской линии (бабушкой, родными братьями и сестрами матери или бабушки).

Кроме того, генотипоскопическая экспертиза может решить задачу установления родства, в частности отцовства или материнства. Такие исследования проводятся как по уголовным делам, связанным с детоубийствами или подменой детей, так и в гражданских делах по разрешению спорного отцовства.

Наконец, с помощью генотипоскопической экспертизы можно диагностировать пол исследуемого объекта. Для исследования признака половой принадлежности, как и любого генетически детерминированного признака, не характерны какие-либо технологические особенности. Поэтому половая принадлежность исследуемого объекта диагностируется обычными методами ДНК-анализа.

При производстве генотипоскопической экспертизы применяют сложный комплекс методов анализа ДНК.

На первом этапе исследования биологические объекты исследования в зависимости от их вида и состояния подвергаются различным процедурам с целью извлечения из них ДНК, пригодной для исследования. От правильного выбора и исполнения метода выделения ДНК и его модификации для конкретного объекта исследования зависит количество и качество выделенной ДНК, т.е. по сути зависит дальнейший успех в проведении генотипоскопического исследования. К основным и широко распространенным в криминалистических исследованиях методам выделения ДНК относятся метод выделения с использованием ионообменной смолы Chelex 100, фенольный метод и метод с использованием веществ, абсорбирующих ДНК.

Метод выделения ДНК с использованием Chelex 100 обычно применяют, когда исследуемый объект не содержит больших количеств белков, его клетки легко лизируются и объект не подвергался длительному хранению. Положительным качеством метода является то, что выделение ДНК этим методом не требует применения токсичных реактивов и проводится в течение относительно короткого времени. Недостатком же метода является невысокая степень очистки ДНК от белковых примесей и невозможность длительного хранения ДНК.

Фенольный метод является универсальным, т.е. может быть применен для выделения ДНК практически из любых объектов. При использовании этого метода происходит наиболее полное удаление белков и различных клеточных компонентов, в результате чего удается получить ДНК высокой степени очистки, пригодной для длительного хранения. К недостаткам этого метода относится необходимость применения высокотоксичных реактивов, а также потенциальная вероятность потери части ДНК, содержавшейся в исследуемом объекте.

Метод выделения ДНК с использованием адсорбирующих веществ также может быть применен для выделения ДНК практически из любых ее содержащих объектов. Данный метод не требует применения токсичных реактивов. В отличие от фенольного метода (при котором очистка экстракта происходит за счет удаления из него белковых примесей), из экстракта удаляют (абсорбируют) саму ДНК, которую затем эллюируют в специальном буфере. Применение данного метода для выделения ДНК способствует более вероятному получению ДНК, свободной от ингибиторов полимеразной цепной реакции (ПЦР). В результате получают ДНК высокой степени очистки, пригодную для длительного хранения. Наиболее важным достоинством метода является возможность его автоматизации и применения в современных роботизированных лабораториях. К недостаткам метода следует отнести необходимость применения специального оборудования, а также вероятность потери части ДНК, содержащейся в исследуемом объекте на этапах абсорбции и эллюции. Кроме того, он является наиболее дорогостоящим методом.

На втором этапе исследования применяют метод ПЦР для синтеза полиморфных участков ДНК генома человека, выделенной на первом этапе. Использование этого метода позволяет увеличить количество ДНК, необходимое для дальнейшего анализа без изменения ее качественных характеристик и признаков, присущих исходной (матричной) ДНК, выделенной из объекта исследования. Кроме этого, на этапе ПЦР имеется возможность включить в синтезируемые последовательности различные флуоресцентные метки, которые необходимы для последующей детекции ДНК.

Следующий этап исследования заключается в электрофоретическом анализе продуктов полимеразной цепной реакции. Существуют несколько методов проведения электрофореза фрагментов ДНК: горизонтальный электрофорез в агарозном геле, вертикальный электрофорез в полиакриламидном геле и капиллярный электрофорез.

Электрофорез в агарозном геле используют, когда не требуется высокого разрешения, т.е. при разделении фрагментов ДНК, различающихся между собой десятками и сотнями пар оснований. Достоинствами метода являются относительная простота технологии электрофореза и отсутствие необходимости в дорогостоящем оборудовании; недостатком - невысокая разрешающая способность электрофореза и связанная с этим ограниченность использования его в большинстве случаев экспертного исследования ДНК.

Электрофорез в полиакриламидном геле позволяет детектировать фрагменты ДНК, различающиеся друг от друга на одну пару оснований. Такая разрешающая способность позволяет использовать его при анализе полиморфных последовательностей ДНК, исследуемых при производстве генотипоскопической экспертизы. К недостаткам метода следует отнести трудоемкость, необходимость применения специального оборудования (источника питания высокого напряжения, аппарата для проведения электрофореза), длительность процесса электрофореза, относительно сложную процедуру визуализации фрагментов ДНК на электрофореграмме.

Капиллярный электрофорез является наиболее современным методом, позволяющим в автоматическом режиме детектировать фрагменты ДНК с наивысшей точностью. Данный метод в настоящее время является основным при анализе полиморфных последовательностей ДНК, исследуемых при производстве генотипоскопической экспертизы. Недостатком метода является необходимость применения специального дорогостоящего оборудования (генетического анализатора).

Кроме названных методов исследования ДНК, в генотипоскопической экспертизе может применяться метод гибридизации, который используется при анализе полиморфных последовательностей ДНК, различающихся между собой нуклеотидной последовательностью и не отличающихся по своей величине. Метод гибридизации является основой технологии исследования полиморфных последовательностей ДНК с помощью так называемых ДНК-чипов. Анализ последовательностей ДНК может быть проведен также методом секвенирования, т.е. прямого установления последовательности нуклеотидов в цепи ДНК. Метод секвенирования состоит из нескольких этапов, которые охватывают, кроме описанных выше выделения ДНК, ПЦР и электрофореза, также реакцию секвенирования с участием флуоресцентномеченных терминаторов цепи.

Современные методы, используемые в генотипической экспертизе, обладают следующими возможностями.

Методы ДНК-анализа позволяют исследовать микроколичества биологического материала. Теоретически минимальная величина объекта, пригодного для исследования методами ДНК-анализа, составляет лишь одну клетку, однако практически объект должен состоять как минимум из десятков или сотен неразрушенных клеток. Такая величина соответствует настолько незначительным размерам, что нередко пригодные для исследования объекты остаются не обнаруженными на месте происшествия. Например, 1 мкл цельной крови (1/30 величины минимальной по размерам капли) содержит около 50 нг ядерной ДНК, что более чем в 50 раз превышает количество ДНК, необходимое для проведения генотипоскопического исследования.

Объектом экспертизы могут быть любые ткани и биологические жидкости организма человека, содержащие ДНК, при этом допустимо их загрязнение микрофлорой, что не оказывает влияния на результаты генотипоскопического исследования.

Генотипоскопическая экспертиза позволяет исследовать следы, содержащие ДНК двух и более лиц. При этом существуют как возможности разделения ДНК разных лиц (например, исследуются следы спермы, смешанные с выделениями потерпевшей), так и возможности анализа смешанных профилей ДНК.

В процессе исследования изучаются конкретные генетические маркеры (полиморфные локусы ДНК). Сохраненные результаты исследования ДНК пригодны для систематизации, что особенно важно при формировании криминалистических учетов, когда необходимо накопление и сохранение данных исследования следов для последующего поиска подозреваемых лиц путем сравнения их данных с уже имеющимися в базе.

По результатам проведения генотипоскопического исследования формулируются выводы, которые принципиально можно разделить на три основных типа: категорический положительный, вероятностный положительный и категорический отрицательный.

Категорический положительный вывод означает, что исследуемый объект произошел от конкретного лица, генетические признаки которого были изучены в экспертном исследовании. Типичная формулировка вывода может быть следующей: "Следы крови, обнаруженные на ________, произошли от гр. И.". До недавнего времени категорический положительный вывод по результатам генотипоскопической экспертизы делался чрезвычайно редко, что было связано с объективными экономическими и техническими причинами, которые не позволяли сузить группу лиц, от которых мог произойти исследуемый объект, до одного конкретного лица. В связи с усовершенствованием технологии генотипоскопического исследования такая формулировка вывода в настоящее время стала возможной.

Положительный вероятностный вывод означает, что изученные генетические признаки исследуемого объекта и генетические признаки лица, проходящего по делу, совпадают, однако кроме данного лица теоретически и практически могут существовать лица с такими же генетическими признаками, которые не исключали бы происхождение от них исследуемого объекта. Типичная формулировка вывода: "Следы крови, обнаруженные на _______, могли произойти от гр. И., вероятность случайного совпадения генетических признаков, выявленных в исследованных следах крови и крови гр. И., составляет (это означает, что данными генетическими признаками обладает один человек из одной тысячи)". Применение такой формулировки вывода в настоящее время обычно связано с отсутствием необходимых материалов для проведения исследования, позволяющего сделать категоричный положительный или отрицательный вывод. При дальнейшем совершенствовании технологий ДНК-анализа ожидается, что доля вероятностных выводов будет значительно снижена.

Категорический отрицательный вывод означает, что выявлены различия в генетических признаках исследуемого объекта и лица, проходящего по делу, что опровергает возможность происхождения от него данного объекта. Типичная формулировка такого вывода может быть следующей: "Следы крови, обнаруженные на _______, не произошли от гр. И.".

Литература

Криминалистическое исследование митохондриальной ДНК биологических следов человека: методич. рекомендации / А.Ю. Культин [и др.]. М.: ЭКЦ МВД России, 2008.

Перепечина, И.О. Вероятностные расчеты в ДНК-дактилоскопии: методич. рекомендации / И.О. Перепечина, С.А. Гришечкин. М.: ЭКЦ МВД России, 1996.

Перепечина, И.О. Экспертная оценка и математическая обработка результатов исследования объектов, содержащих ДНК двух и более лиц: методич. рекомендации / И.О. Перепечина, С.А. Гришечкин. М.: ЭКЦ МВД России, 1997.

Пименов, М.Г. Научные и практические аспекты криминалистического ДНК-анализа: учеб. пособие / М.Г. Пименов, А.Ю. Культин, С.А. Кондратов. М.: ЭКЦ МВД России, 2002.


Сейчас читают про: