Допустимые уровни микробной обсемененности воздуха

Конспект до 06.04.2020г.

Практическое занятие №11Учебник. Глава 9.Основные методы диагностики инфекционных заболеваний, стр.91

Практическое занятие №12Сбор, хранение и транспортировка   материала для исследований, стр.92

Практическое занятие № 13

Тема: «ОСНОВЫ САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ»

 

Санитарно-микробиологическое исследование

 

Санитарная микробиология — наука о микрофлоре окружаю­щей среды (воды, воздуха, почвы и др.) и связанных с ней про­цессов, которые могут оказывать неблагоприятное влияние на здо­ровье людей.

С помощью санитарно-микробиологических исследований ре­шают вопрос о наличии и присутствия опасных для человека микробов, их токсинов в объектах внеш­ней среды: воде, воздухе, почве, пищевых

продуктах, лекарствах, различных материалах, оборудовании и др.

Комплексное сани­тарно-микробиологическое исследование включает: определение косвенных показателей неблагополучия: общей микробной обсемененности (микробного числа), титра или индекса санитарно ­показательных микробов; реже пря­мых — обнаружение патогенных микробов в объекте.

Микробным числом называют количество микробов содержащихся в 1 мл жид­кости, 1 г твердого вещества или 1 кубометре воздуха. Для опреде­ления делают  посевы материала на питательный агар с под­счетом выросших колоний (1 колонию обычно образует 1 клетка). Результат выражают в колониеобразующих единицах — КОЕ/мл, КОЕ/г или КОЕ/м³. Если, например, на чашке с посевом 1 мл воды, разведенной 1: 1000, выросло 120 колоний, то микробное число составляет 1,2 • 10⁵ КОЕ/мл. В соответствии с принятым стан­дартом (ГОСТом) водопроводная вода должна иметь микробное число менее 50. Микробное число почвы определяют аналогично после посевов 10-кратных разведений почвенной суспензии.

Санитарно-показательные  микробы, являются представителями нормальной микрофлоры тела человека и слу­жат показателями санитарного неблагополучия объекта, т. е. его загрязнения выделениями человека. В качестве санитарно - показательных выбраны микробы, отвечающие следующим требова­ниям:

постоянно и в больших количествах присутствующие в выделе­ниях человека;

не имеющие других природных резервуаров или естественных сред обитания;

сохраняющиеся в объектах в течение определений сроков, остаются жизнеспособными;

не размножающиеся (интенсивно) в объектах внешней среды;

легко идентифицируемые, поддающиеся количественному опре­делению.

Например - основной показатель фекального загрязнения почвы, пищевых продуктов, рук, спецодежды персонала, воды, лабора­торной посуды, предметов обихода, лекарственных средств — бак­терии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бак­терии. Воздух оценивают по содержанию стафилококков и стреп­тококков, попадающих в него вместе с другими микробами из дыхательных путей и полости рта человека. К СПМ относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги). В ходе оценки состояния объекта определяют индекс — количе­ство СПМ в единице объема (1 литр, 1 г или 1 кубометр) матери­ала или титр — наименьший объем (в мл), или весовое количе­ство (в г) материала, в котором еще обнаруживаются санитарно - ­показательные микробы.

Например, основной показатель фекального загрязнения — колиформные бактерии, их определение проводят в смывах с рук, спецодежды персонала, лабораторной посуды, в нестерильных ле­карственных формах, инъекционных растворах и глазных каплях до стерилизации. Воздух оценивают по содержанию золотистого стафилококка, попадающего в него из верхних дыхательных пу­тей, ротовой полости. Его считают показателем капельного за­грязнения воздуха. Другими микробами, отражающими санитар­ное неблагополучие того или иного объекта, являются дрожже­вые и плесневые грибы, синегнойная палочка, сальмонеллы.

Точность санитарно-микробиологических исследований обес­печивается: правильным отбором, хранением и транспортиров­кой проб в лабораторию, использованием стандартных методов, комплексностью исследования и его повторностью.

 

Вода

 

Среди объектов, подлежащих микробиологическому контро­лю, важное место отводится исследованию воды. Микробное за­грязнение воды более опасно, так как при отсутствии у воды органолептических признаков загряз­нения могут возникать массовые заражения, имеющие тяжелые последствия.

В соответствии с действующими нормативными документами контролю подлежат:

вода питьевая (централизованного и местного водоснабжения, т.е. из водопровода, колодцев, родников и скважин);

вода плавательных бассейнов;

вода открытых водоемов (из рек, водохранилищ);

сточные воды;

вода, очищенная для приготовления лекарств;

вода для приготовления инъекционных растворов и глазных ка­пель.

Предупредительный надзор осуществляют:

1) при решении вопросов водоснабжения и канализации насе­ленных территорий;

2) при санитарной оценке бассейнов, пляжей, мест коллектив­ного отдыха и т.д.

Текущий санитарный надзор осуществляют:

1) при оценке качества питьевого водоснабжения населенных мест;

2) при оценке санитарного состояния поверхностных вод для установления степени влияния биологической контаминации на способность воды к самоочищению; (после весенних паводков).

3) при контроле над обезвреживанием сточных вод;

4) по эпидемическим показаниям для выяснения возможного пути передачи инфекционных заболеваний (проводят обнаруже­ние санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов).

Контроль воды осуществляют в соответствии с имеющимися нормативами (табл. 11.1).

Отбор проб. Пробы воды питьевой из разводящей сети город­ского водопровода отбирают работники центра госсанэпиднадзо­ра. Для отбора проб используют стерильные флаконы емкостью 500 мл с притертой резиновой, корковой или каучуковой проб­кой. Предварительно проводят обжигание кранов пламенем горя­щего тампона, смоченного спиртом, и спускают воду в течение 10—15 мин при полностью открытом кране. Бумажный колпачок с пробкой снимают с флакона непосредственно перед ее запол­нением, не касаясь руками горлышка флакона и пробки.

Пробы воды из бассейнов в ходе их эксплуатации отбирают не менее чем в двух точках (глубокой и мелкой части) с 25 — 30 см от поверхности в количестве одного литра один раз в месяц.

Пробы воды очищенной, используемой для приготовления ле­карственных форм (кроме лекарств - для инъекций и глазных ка­пель) отбирают в количестве 500 мл в стерильные бутылки, за­крытые ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы от­бирают из бюретки, у которой предварительно обжигают кончик с помощью ватного тампона, смоченного спиртом.

Пробы воды очищенной для приготовления инъекционных ра­створов и глазных капель отбирают в стерильные флаконы в количестве 20 мл непосредственно из баллона сразу же после пере­гонки или из сосудов, в которых вода стерилизуется.

Методика исследования. Общее микробное число. ОМЧ — коли­чество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бак­терий в 1 см³ (1 мл) воды — определяют у всех видов воды. Иссле­дуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным питательным агаром (ме­тод глубинного посева). Инкубируют при 37 °С 24 ч, после чего при комнатной температуре еще 24 ч. Подсчитывают на 2-х чаш­ках число выросших колоний (на поверхности и в глубине пита­тельного агара) и рассчитывают среднее арифметическое значе­ние. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов исследуемую воду засевают по 0,5 мл на среду Сабуро и инкубируют при ком­натной температуре в течение 3 — 4 суток. Подсчитывают число вы­росших колоний и также рассчитывают среднее арифметическое. Результат (ОМЧ) вычисляют путем суммирования среднего ариф­метического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов и выражают в КОЕ/мл.

Определение колиформных бактерий.  Тер­мотолерантные колиформные бактерии быстро отмирают во внеш­ней среде, поэтому их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.

Для определения колиформных бактерий в питьевой воде и воде очищенной используют метод мембранных фильтров. Иссле­дуемую воду (3 по 100 мл) пропускают через 3 бактериальных фильтра из нитроцеллюлозы, которые затем помещают на среду  Эндо и инкубируют при 37 °С 24 ч. Подсчитывают количество вы­росших на фильтрах лактозоположительных колоний, идентифи­цированных как колиформные бактерии.

Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофа­гов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхност­ных источников и питьевой воде, подготовленной из нее, а так­же в сточных водах. Они являются индикаторами эффективности охраны грунтовых вод и очистки питьевой воды. Исследование проводят методом агаровых слоев по Грациа. Для титрования колифагов исследуемую воду смешивают с расплавленным и остуженным питательным ага­ром, куда вносят также индикаторный штамм Е. coli. Получен­ную смесь выливают вторым слоем на питательный агар в чашке Петри и после застывания среды чашку инкубируют при 37 °С 24 ч. В результате индикаторная культура образует равномерный сплошной рост, а при наличии колифагов в этом «газоне» обра­зуются прозрачные бляшки («негативные колонии» бактериофага). Результат исследования выражают в бляшкообразующих еди­ницах (БОЕ/мл).

Определение спор сульфитредуцирующих клостридий. Присутствие спор сульфитредуцирующих клостридий определяют в воде для оценки эффективности работы сооружений по подготовке питье­вой воды. Для этого испытуемую воду вносят в расплавленную и остуженную среду Вильсона—Блера. Среда содержит тиосульфат (гипосульфит) и бесцветную соль железа. В результате прораста­ния спор, размножения клостридий и восстановления ими суль­фита образуется сульфид железа, который придает среде черный цвет.

При использовании воды  поверхностных водоисточников, а также в крупных населенных пунктах,  питьевую воду исследуют ежедневно. В случае повторного обнаружения колиформных бак­терий и/или колифагов проводят определение в воде возбудите­лей бактериальных и вирусных кишечных инфекций.

Ввиду того что очистка и обеззараживание воды, а также су­ществующие методы санитарно-микробиологического исследова­ния воды по ряду причин могут быть неэффективными, наилуч­шим способом обеспечения безопасности воды считается охрана водоисточников от микробного загрязнения.

 

Почва

 

Знания состава и значения микрофлоры почвы для человека, влияния на нее различных условий необходимы для корректной санитарно-микробиологической оценки почв (в плане ее эпиде­мической безопасности). Санитарно-микробиологическое иссле­дование почвы регламентируется инструкциями по предупреди­тельному и текущему санитарному надзору.

Предупредительный надзор осуществляют:

а) при планировке, строительстве и реконструкции вновь за­селяемых участков и населенных мест;

б) при выборе участков для строительства лечебно-профилактических и аптечных учреждений, санаториев, детских учрежде­ний;

в) при решении вопросов водоснабжения и канализации насе­ленных территорий;

г)  при санитарной оценке пляжей, мест коллективного отды­ха и т.д.

Текущий санитарный надзор осуществляют:

а) при оценке санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению после загрязнений (например, почву детских садов, больниц, зон отдыха исследуют 2 раза в год);

б) при контроле за почвенными и биотермическими методами обезвреживания сточных вод и отбросов (1—4 раза в месяц);

в) по эпидемическим показаниям для выяснения возможного пути передачи инфекционных заболеваний.

При осуществлении текущего санитарного надзора рекоменду­ется сокращенный анализ. Он включает: определение ОМЧ, БГКП, титра строгих анаэробов, термофильных бактерий, нитрифици­рующих бактерий. В полный санитарно-микробиологический ана­лиз дополнительно входят: определение численности и процент­ного отношения спор к общему количеству микроорганизмов, количество актиномицетов, грибов, целлюлозоразрушающих мик­роорганизмов и аммонификаторов, основных групп почвенного микробиоценоза и ряд дополнительных исследований (например, токсичность почв для микроорганизмов). По эпидемическим по­казаниям в ходе исследований проводят обнаружение патогенных микроорганизмов.

Отбор проб. Пробы отбирают с прямоугольного участка разме­ром не менее чем 5 х 5 м из 5 точек («метод конверта»). При этом в условиях асептики берут с глубины 20 — 25 см образцы для приго­товления смешанной пробы весом 1 кг.

Методика исследования. ОМЧ почвы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10-кратных разведений или мето­дом прямой микроскопии (по Перфильеву). Если предполагается невысокая степень фекального загрязнения, БГКП в почве опреде­ляют методом бродильных проб или методом мембранных фильт­ров (см. выше); при высокой степени — прямым посевом почвен­ной суспензии (1:10) на среду Эндо. Важным критерием санитар­ного состояния почвы и ее способности к самоочищению является перфрингенс-титр почвы (минимальное количество почвы, в кото­ром еще определяются Clostridium perfringens). При фекальном загрязнении почвы уже через 4 — 5 мес эшерихии исчезают, а клостридии обнаруживают в титре 0,01 г. Определяют перфрингенс-титр глубинным посевом на среду Вильсона — Блера из 10-кратных раз- ведений почвенной суспензии. Число термофильных бактерий оп­ределяют глубинным посевом на плотные среды с инкубировани­ем при 60 °С в течение суток. Титр нитрифицирующих бактерий определяют посевом из 10-кратных разведений почвенной сус­пензии на жидкую синтетическую среду Виноградского.

На свежее фекальное загрязнение указывают: обнаружение эн­терококков, большое количество БГКП при отсутствии нитри­фицирующих бактерий и термофилов, относительно высокое со­держание вегетативных форм клостридий. Определение термофиль­ных бактерий помогает оценить загрязнение почвы навозом, ком­постом или сточными водами и стадию разложения их органиче­ского субстрата. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процессов самоочищения. Для более полной оценки процесса самоочищения определяют также группы микроорганиз­мов, быстро разрушающих органический субстрат: бациллы, актиномицеты, грибы.

 

Воздух

 

Санитарно-микробиологические показатели воздуха нормиру­ются в зависимости от типа и назначения помещений (табл. 11.3). Их определяют седиментационным или аспирационным методами.

Таблица 1

Допустимые уровни микробной обсемененности воздуха