Реакция агглютинации с аутоштаммами в диагностике заболеваний, вызываемых условно патогенными энтеробактериями

Диагностическая ценность этой реакции в значительной мере связана с выявлением характера антителообразования в динамике заболевания. Оптимальные сроки взятия сыворотки 1-2, 7-10, 14-15-й дни заболевания. Полученные от больного сыворотки следует сохранять в холодильнике и исследовать одномоментно ("парные сыворотки"). При специфическом иммунном ответе в конце первой - начале второй недели болезни титр антител нарастает не менее чем в 4 раза, а затем постепенно снижается.

При выделении подвижных культур, представителей родов Escherichia, Edwardsiella, Citrobacter, Enterobacter, Proteus и др. сыворотку больных исследуют на H- и O-антитела.

Для H-агглютинации культуры выращивают на свежескошенном СПА в течение 18 часов, затем смывают ИХН и доводят взвесь бактерий до густоты 1 млрд/мл. В ряду из 5 обычных агглютинационных пробирок с 0,25 мл ИХН титруют исследуемую сыворотку, начиная с разведения 1:50, после чего вносят в каждую пробирку, включая одну контрольную с 0,25 мл ИХН, по 0,25 мл приготовленной бактериальной взвеси. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в термостат при 37°C на ночь. Учитывают реакцию, осторожно покачивая пробирку. Агглютинат имеет вид хлопьев. При невозможности взятия сывороток в динамике болезни ориентировочным титром считают положительный результат реакции H-агглютинации в разведении 1:100 - 1:200.

Для O-агглютинации используют взвесь убитой кипячением суточной агаровой культуры бактерий густотой в 3 млрд/мл ИХН.

Перед постановкой реакции бактериальную взвесь необходимо 2-3 раза отмыть путем центрифугирования. Исследуемую сыворотку титруют в объеме 0,5 мл, начиная с разведения 1:10 на ИХН в серологических пробирках. В каждую пробирку, включая контрольную, вносят по 1 капле приготовленной бактериальной взвеси, штатив встряхивают и помещают в термостат при 37°C на ночь. В случае положительной реакции O-агглютинат при осторожном встряхивании имеет мелкозернистый характер. При невозможности обследования больного в динамике и получении лишь одной сыворотки позже 5 дня болезни условно диагностическим титром считают положительную реакцию в разведении 1:20 и выше.

В ответе указывают: "Реакция агглютинации с аутоштаммом ________________ отрицательная"; "Реакция агглютинации с аутоштаммом __________________ положительная до титра _____________________".

______________________________

*(1) "Инструкцию по микробиологической диагностике кишечных заболеваний, вызванных шигеллами, сальмонеллами и энтеропатогенными кишечными палочками", утв. нач. ГСЭУ Минздрава СССР 11.05.66 г. N 629-66, считать утратившей силу.

*(2) На русском языке издан его сокращенный вариант - Краткий определитель бактерий Берги (1980).

*(3) Женское грудное молоко исследуют при наличии специальных показаний.

*(4) Как указывалось, посев делают уколом петли через выступающий над средой конец трубочки до дна пробирки, а высев - из верхнего слоя среды в пробирке.

*(5) КОЕ - колониеобразующая единица.

*(6) Сплошной рост не поддающихся подсчету колоний установленного вида.

*(7) Для приготовления питательных сред используют химически чистые реактивы.

*(8) Примечание. Для получения сред обогащения двойной концентрации (при исследовании жидких материалов) соответственно уменьшают вдвое объем дистиллированной воды.

*(9) Возможно использование 50-% водного раствора мочевины, выдержанного 2-3 суток для "самостерилизации", и добавление к среде из расчета конечного содержания мочевины в среде 2%.

*(10) Выпускаются коммерческие сухие среды с углеводами (глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой и маннитом).

*(11) Индикаторные бумажки можно приготовить, используя реактив Ковача или Эрлиха.

*(12) Выпуск коммерческих K-сывороток предполагается в ближайшее время.

*(13) Проведение реакции агглютинации и отбор культур в К-форме осуществляют в соответствии с "Наставлением по применению клебсиеллезных диагностических агглютинирующих сывороток".

*(14) Определение биоваров проводят в соответствии с "Методическими материалами по биохимическому типированию шигелл Зонне" (МЗ СССР, 1971).

*(15) Фаготипирование трех сероваров сальмонелл: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B (S. schottmuelleri) проводится с использованием соответствующих наборов типовых бактериофагов, выпускаемых Тбилисским НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР.

*(16) Выпускаются Тбилисским научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток.

*(17) См. "Методические материалы по внутривидовому типированию дизентерийных бактерий Зонне по колициногенности и колициночувствительности" - МЗ СССР, 1971.

*(18) См. "Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агаре с использованием дисков", МЗ СССР, 1983.

*(19) См. "Каталог препаратов для диагностики бактериальных инфекций", М., 1981 г.

*(20) (ТУ 64-2-273-79).