Различной патологии животных

Таблица 41 - Микобактерии, которые могут быть выделены при

Бактериологическое исследование

Для исследования прижизненно направляют для исследования бронхиальную слизь, молоко; посмертно - бронхиальные, заглоточные, средостенные, предлопаточные, надвымянные лимфатические узлы. Труп птицы (или тушку) направляют це­ликом — исследуют пораженные печень, селезенку, легкие, яичники. Мате­риал транспортируют в свежем или замороженном виде. В случае необходи­мости тканевой материал консервируют в 30%-ном водном растворе глице­рина.

Микроскопическое исследование исходного материала. Бактериоскопическое исследование дает возможность выявить возбуди­тель при условии, что в 1 кубическом см материала содержится минимум

Таблица 41 (продолжение)

1) Использованы данные Bispring W, Amtsberg G (1998); Bergeys Manyal of Systematic Bacteriology (1994); Roberts A.D., Koneman E.W., Kim Y.K (1995); RunyonE.H. (1959), 1987).

2) Согласно последним данным род Mycobacterium подразделяется на три группы: 1 — медленнорастущие; 2 — быстрорастущие; 3 — некультивируемые и требующие особых питательных сред (Runyon Е.Н., 1987)

50-100 тыс. микобактерий, т.е. он является наименее чувствительным из всех методов. Морфологически некоторые виды сапрофитных микобакте­рий сходны с патогенными, поэтому результаты исследования имеют ори­ентировочное значение.

Мазки делают из мокроты, гноя и т.п. При исследовании органов берут участки без признаков обызвествления. Мазки получают путем раздавлива­ния материала между предметными стеклами и фиксируют спиртэфиром. Мочу предварительно многократно центрифугируют с наслоением каждый раз но­вой порции, из осадка готовят мазки. Молоко центрифугируют при 2000-3000 об/мин., в течение 30-40 минут. Мазки делают из верхнего слоя и осадка. После высушивания мазки обрабатывают для удаления жира спирт-эфиром в течение 20-30 минут. Кал (небольшое количество) растирают в стерильной ступке, добавляют для получения жидкой консистенции 25%-ный раствор NaCl. Массу фильтруют через марлю. К 4-5 мл фильтрата добав­ляют 1-2 мл эфира, центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 15-25 минут. Из верхнего слоя готовят мазки.

С целью концентрирования клеток микобактерий и повышения эффектив­ности микроскопического исследования применяют также следующие методы.

Метод флотации. В колбу емкостью 250 мл помещают 10-15 мл мате­риала (мокрота, осадок мочи, гной, экссудат, кал), добавляют равный объем 0,5%-ного раствора NaOH. В случае густого материала добавляют двой­ной объем щелочи. Компоненты встряхивают несколько раз, вносят 50 мл дистиллированной воды и 1 мл толуола (ксилола, бензина), встряхивают смесь 10-15 минут на шуттель-аппарате. Вносят в колбу дистиллирован­ную воду до горлышка и оставляют при комнатной температуре на 1-2 часа.

Образовавшийся на поверхности жидкости сливкообразный слой отса­сывают пипеткой и готовят из этого материала мазки.

Способ Гона. Исследуемый материал растирают в стерильной ступке, смешивают 1:4 с 3-6%-ным водным раствором H₂SО₄ и центрифугируют в течение 10-15минут. Осадок 2-3 раза отмывают физиологическим ра­створом. Из осадка готовят мазки.

Способ Аликаевой. Исследуют свежий или малозагрязненный материал. Ткани разрезают на кусочки размером 0,5 х 0,5 см, заливают на 10-20 ми­нут 3-6%-ным раствором H₂S0₄. Затем кислоту удаляют и заменяют ее сте­рильным физиологическим раствором (в большом объеме). Через 5-8 минут физиологический раствор удаляют, кусочки ткани заливают небольшим ко­личеством физраствора и растирают в ступке. Из гомогената готовят мазки для окраски.

Приготовленные мазки окрашивают по методу Циля-Нильсена. Окрашенные мазки изучают, внимательно просматривая много полей зрения (30-500). В положительных случаях обнаруживают палочковидные, тонкие, прямые бактерии, иногда зернистые, изогнутые, расположенные под углом в виде цифры V, кучками, небольшими скоплениями. Клетки окрашены в красный цвет, размер 0,2-0,5 х 1-4 мкм, фон синий.

Метод прямого флуорохромирования. Для прямого обнаружения мико­бактерий в материале можно использовать метод люминесцентной микро­скопии. Из материала, подготовленного общепринятыми способами, гото­вят мазки, фиксируют не на пламени, окрашивают раствором флуорохромов (0,1 гаурамина 0,01 г родамина в 100 мл дистиллированной воды) в течение 10-15 минут и осторожно промывают дистиллированной водой; обесцвечивают 3%-ным раствором НС1 в 70%-ном этаноле 15-30 с и про­мывают; обрабатывают раствором, содержащим 1 г кислого фуксина, 1 г ледяной уксусной кислоты и 500 мл воды в течение 1-2 минут, затем метиленовой синькой Леффлера — 2 минуты; промывают водой, подсушивают и микроскопируют.

Клетки микобактерий золотисто-зеленоватые. Более эффективен вари­ант с подращиванием микобактерий на мембранных фильтрах. С этой целью на скошеннную среду Петраньяни помещают полоску мембранного фильтра № 3, опустив ее конец в конденсационную жидкость и засевают материалом.

Через три дня инкубации полоску бумаги помещают на предметное стек­ло, фиксируют на пламени, окрашивают, как описано выше. Микроскопи­руют в сине-фиолетовом свете с увеличением 7x40. В положительных случа­ях находят ярко-оранжевые или золотисто-зеленые микроколонии на темно-зеленом фоне.