Количественное определение

1. неводное титрование (индикатор - кристаллический фиолетовый)

2. алкалиметрия (индикатор бромтимоловый синий)

3. фотоколориметрический метод на основе индофеноловой реакции

Ситуационная задача №

При оценке качества данного лекарственного вещества в образцах одной серии внешний вид не отвечал требованиям по разделу «Описание» - порошок был отсыревшим и грязно-зеленого цвета.

Дайте обоснование причинам изменения его качества по данному по­казателю в соответствии со способами получения и свойствами. Предло­жите испытания, характеризующие его качество.

Приведите русское, латинское и рациональное название препарата. Охарактеризуйте физико-химические свойства (внешний вид, растворимость, спектральные и оптические характеристики) и их использование для оценки качества.

• В соответствии с химическими свойствами предложите реакции идентификации и методы количественного определения. Напишите уравнения реакций.

Acidum folicum.

Кислота фолиевая.

N-{4’-[(2-амино-4-окси-6-птеридил)-метил]-амино}-бензоил-L(+)-глютаминовая кислота.

Витаминное средство, относится к группе витаминов В₁₂. Вместе с витамином В₁₂ стимулирует эритропоэз, участвует также в синтезе аминокислот, нуклеиновых кислот, пуринов и пиримидинов, в обмене холина. Применяется для стимулирования эритропоэза при макроцитарных анемиях, при спру. Применяют при анемиях и лейкопениях, вызванных лек. веществами и ионизирующей радиацией. При фолиевом дефиците, развивающемся при употреблении противоэпилептических средств и др. заболеваниях.

Основу химической структуры фолиевой кислоты составляет гетероциклическая система - птеридин, состоящая из двух конденсированных гетероциклов пиримидина и пиразина:

Пиримидин Пиразин Птеридин

Производное птеридина 2-амино-4-окси-птеридин известно под названием птерина. Он является структурной основой птериновой кислоты:

Птерин Птериновя кислота

Птерин – составная часть молекулы кислоты фолиевой. Кроме птерина в состав молекулы кислоты фолиевой входит и один остаток n-аминобензойной кислоты. Птерин, связанный метиленовой группой с n-аминобензойной кислотой, образует птероиновую кислоту:

Описание: желтый или желто- оранжевый кристаллический порошок без запаха и вкуса. На свету разлагается, гигроскопичен.

Растворимость:

Практически не растворима в воде, 95% спирте, ацетоне, бензоле, эфире и хлороформе, малорастворима в разведенной соляной кислоте, трудно растворима в разведенной серной кислоте, легко растворима в растворах едких щелочей.

Для контроля качества можно использовать УФ-спектр поглощения раствора кислоты фолиевой в 0,1М растворе NaOH трех характерных максимумов (256, 283, 365 нм) и трех минимумах (235, 265, 332 нм). Отношение оптических плотностей 0,001% раствора при 256 и 365 нм должно быть от 2,8 до 3.

2.

Подлинность.

В анализе кислоты фолиевой применяют реакции окисления, комплексообразования, кислотно-основные свойства растворов. При окислении необходимо строгое соблюдение температурного режима. Для испытания подлинности ФС рекомендует использовать ее свойство легко окислятся перманганатом калия при нагревании до 80-85°С. Избыток реактива удаляют действием раствора пероксида водорода, смесь фильтруют и наблюдают характерную голубую флуоресценцию фильтрата в УФ-свете при 254 нм. Испытание основано на образовании n-аминобензоилглутаминовой и птериновой кислот.

Образовавшаяся птериновая кислота обуславливает флуоресценцию. Разработан реактив, позволяющий достигнуть максимальной интенсивности флуоресценции производных птерина. В его состав входит окислитель- калия хлорат, соли аммония и серная кислота.

Для установления подлинности используют также метод ТСХ. На пластинку Плазмахром или Армсорб УФ-254 наносят растворы испытуемой кислоты фолиевой и ее ГСО. Хроматографируют восходящим методом в системе растворителей: этанол-н-пропанол-раствор аммиака (60:20:20). Детектируют в УФ-свете при 365 нм. Положение и размер пятен должны быть идентичны.

Наличие в птериновой части молекулы кислоты фолиевой подвижного атома водорода в гидроксильной группе и третичных атомов азота позволяет получать нерастворимые в воде окрашенные внутрикомплексные соли с катионами меди (II), свинца, серебра, кобальта, железа (III). Общая формула этих солей:

Во избежание образования гидроксидов металлов после добавления щелочи смесь фильтруют и выполняют испытание капельным методом на часовом стекле. При прибавлении раствора ацетата свинца выпадает лимонно-желтый осадок, сульфата меди (II)- зеленый, нитрата серебра - желто-оранжевый, нитрата кобальта - темно-желтый, хлорида железа (III)- красно-желтый.

Количественное определение.

Описано обратное Алкалиметрическое определение кислоты фолиевой. Оно основано на образовании натриевых солей за счет незамещенных карбоксильных групп. Растворяют навеску в избытке 0,1М раствора гидроксида натрия, а затем медленно титруют несвязавшееся количество щелочи 0,1М раствором хлороводородной кислоты. Используют либо смешанный индикатор (фенолфталеин с метиленовым синим), либо тимолфталеин.

Спектрофотометрическое определение кислоты фолиевой может быть выполнено при длине волны 365 нм (растворитель 0,1М раствор гидроксида натрия) или 320 нм (растворитель 5% раствор серной кислоты).

Способ фотоколориметрического определения (по ФС) основан на предварительном окислении перманганатом калия до птериновой и n-аминобензоилглутаминовой кислот (химизм выше). Последнюю затем диазотируют раствором нитрита натрия и сочетают с N-(1-нафтил) - этилендиамином:

Для удаления избытка азотистой кислоты прибавляют сульфаминовую кислоту или мочевину.

Интенсивность окраски образовавшегося азокрасителя измеряют с помощью фотоэлектроколориметра со светофильтром, имеющим максимум пропускания 550 нм. Содержание кислоты фолиевой вычисляют по сравнению оптических плотностей испытуемого раствора и раствора ГСО.

Методика фотоколориметрического определения кислоты фолиевой по МФ отличается тем, что гидрирование осуществляют, действуя порошком цинка в присутствии хлороводородной кислоты. Параллельно проводят контрольный опыт.

Полярографическое определение кислоты фолиевой основано на ее способности легко восстанавливаться в среде карбоната натрия до 7,8-дигидрофолиевой кислоты. Обратный процесс легко происходит даже под действием кислорода воздуха: