2015-04-08
799
1.Раствор хлористого натрия (изотонический). 0,9 г NaCl растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
2.0,2 н раствор едкого натра, освобожденный от углекислого газа. 20 мл 1 н раствора NaOH доводят до объема 100 мл прокипяченной дистиллированной водой.
З. Биуретовый реактив. 4,5 г сегнетовой соли (KNaC4H406) растворяют в 40 мл 0,2 н NaOH. После растворения прибавляют 1,5 г CUS04' 5Н2О и 0,5 г КI. Раствор доводят до 100 мл 0,2 н NaOH. Хранят в темном месте (или в посуде из темного стекла). Реактив пригоден около месяца.
4.Щелочной раствор йодистого калия. 0,5 г Кl растворяют в 100 мл 0,2 н NaOH. Хранят в посуде из темного стекла не более двух недель.
5.Рабочий раствор биуретового реактива. 20 мл биуретового реактива (3) смешивают с 80 мл раствора КI (4). Хранят в темном месте не более двух недель.
6.Стандартный раствор альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки). 1,0 г альбумина растворяют (в небольшом цилиндре или точной мерной пробирке) в 6-7 мл изотонического раствора NaCl с последующим доведением им до конечного объема 1О мл. Для полного растворения белка содержимое пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин. Поскольку ценообразование ускоряет разрушение альбумина, с целью предотвращения этого нежелательного эффекта можно внести одну (или несколько) капель октилового спирта либо медицинского (диэтилового) эфира, понижающих поверхностное натяжение.
1 мл стандартного раствора содержит 0,1 г белка (100 г/л). Можно использовать ампулированный раствор альбумина концентрации 100 (или 98) г/л.
Ход определенuя. К 5 мл рабочего раствора биуретового реактива добавляют, избегая образования пены, 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 мин, самое позднее через 1ч, пробу колориметрируют на ФЭКе в кювете с длиной оптического пути 10 мм при зеленом светофильтре (с максимумом пропускания при длине волны 540-560 нм, лучше 546 нм). Показатели абсорбции учитывают в сравнении с таковыми контрольной пробы, которую готовят путем добавления к 5 мл рабочего раствора биуретового реактива О, 1 мл реактива 1 (практически раствор NaCl можно и не добавлять). Расчет ведут по калибровочной кривой.
Для построения калибровочного графика из основного стандартного раствора белка (реактив 6) готовят 3 серии рабочих стандартных растворов, как указано в таблице №1 (0,1 мл основного стандартного раствора содержит 0,91 г белка). Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и вносят в пробирки, содержащие 5,0 мл рабочего биуретового реактива. Через 30-60 мин замеряют оптическую плотность с:тандартных проб, учитывая абсорбцию контрольной пробы (см. ход определения).
Данные к построению калибровочного
графика для определения общего белка сыворотки крови
| Номер проб ирок | Стандартный | Физиологический | Концентрация |
| раствор белка, мл | раствор NaCI, мл | белка, г/л | |
| 0,4 | 0,6 | 40,0 | |
| 0,5 | 0,5 | 50,0 | |
| 0,6 | 0,4 | 60,0 | |
| 0,7 | 0,3 | 70,0 | |
| 0,8 | 0,2 | 80,0 | |
| 0,9 | 0,1 | 90,0 | |
| 1,0 | - | 100,0 |
Таблица №1
Концентрация общего белка в сыворотке крови практически здоровых людей: у взрослых - 65-85 г/л (в возрасте старше 60 лет содержание белка в плазме снижается); у новорожденных доношенных - 46-70 г/л, недоношенных 36-60 г/л (в крови из пуповины- 40-80 г/л); У детей в возрасте 1 нед-44-76 г/л, 7 мес - 1 года - 51-73 г/л, 1 года - 2 лет - 56-75 г/л, 3-6 лет - 56-85 г/л.
В норме содержание общего белка в ликворе колеблется в пределах 150-450 мг/л, а показатели суточной экскреции с мочой варьируют от 25 до 70 мг.
