Определение лизоцимов молока по В.И.Мутовину

В основе выявления лизоцимов положен метод диффузии в агар и образования зоны задержки роста (ЗЗР) тест-культуры микроба. На агаровую пластинку в чашке Петри наносят по 0.2 мл суточной буль­онной тест-культуры и равномерно распределяют по всей поверхнос­ти. Выдерживают 20-30 мин при комнатной температуре для пропиты­вания агара, а затем с помощью пробойника диаметром 0,8-1 см де­лают 4 луночки, в которые вносят по 0,01 мл (2 капли) исследуемо­го молока. Чашки выдерживают при комнатной температуре (18-20°С) 30-40 мин, а затем 16-18 ч в термостате при температуре 36-38°С, после чего измеряют ЗЗР

а) «Лизоцим молока» - ЛМ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамм ВМ- 57, выделенный из молока здоровой коровы.

Максимальный уровень ЛМ (25 мм и более) у здоровых коров на 2-6 месяцах лактации, у больных - понижен (менее 18 мм) или от­сутствует (0). Термостабилен, разрушается при температуре 70°С, в сыром молоке сохраняется до 10 дней при температуре 4-6°С.

б) «Лизоцим вымени» - ЛВ

В качестве тест-культуры используют слезный микрококк Фле­минга.

Не коррелирует с ЛМ, повышается уровень в молоке в конце лактации и у больных маститом коров. В сыром молоке сохраняется до 10 дней при температуре 4-б°С.

в) «Лизоцим колостральный» - ЛК

В качестве тест-культуры используют белый стрептококк штамм.

Максимальные концентрации ЛК в молозиве, через 10 дней после отела его уровень ниже уровня ЛМ.

г) «Лизоцим термостабильный» - ЛТ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамм ВМ-57.

Выявляется в молоке стародойных коров после прогревания при температуре 70°С в течение 30 мин и сохраняется до 1,5-2,0 мес., в сыром молоке сохраняется 5-7 дней

д) «Лизоцим инверсионный» - ЛИ

В качестве тест-культуры используют розовый стафилококк штамм 56.

Отсутствует в молоке здоровых коров, обнаруживается в секрете пораженных маститом долей вымени.

е) «Лизоцим основной» - ЛО

В качестве тест-культуры используют ацидофильную палочку штамм 17 т. Определяют методом серийных разведении. В разведения молока (молозива) вносят в объеме 10% суточную бульонную тест-культуру, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение суток, после чего учитывают рост.

В молозиве ЛО действует бактерицидно в разведении 1:10 000, на 10-й день после отела в молоке его антибактериальное действие проявляется в разведении 1:2-1:4, а у больных маститом коров ЛО несколько повышается.