1. Пикриновая кислота.
2. Натрий едкий.
3. Трихлоруксусная кислота
4. Калибратор – 177мкмоль/л
Ход определения концентрации креатинина в сыворотке крови.
1. Подготовка образцов к анализу:
К 0,5 мл исследуемого образца добавте 1,0 мл дистиллированной воды и 0,5 мл реагента №3. Содержимое пробирок перемешайте и через 10 минут центрифугируйте при 900g в течении 15минут. Для дальнейшего анализа используйте прозрачную надосадочную жидкость (супернатант).
Поставляемый в составе набора калибратор в данной процедуре не нуждается, так как она уже была роведена на предприятии – изготовителе.
Для приготовления контрольного раствора смешайте 0,5 мл реагента №3 и 1,5 мл дистиллированной воды (центрифугировать необязательно).
2. Проведение анализа:
Подготовте пробы следующего состава: | Опытная проба | Калибровочная проба | Контрольная проба |
Супернатант, мл | 1,0 | -- | -- |
Калибратор, мл | -- | 1,0 | -- |
Контрольный раствор, мл | -- | -- | 1,0 |
Реагент №2, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Реагент №1, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Содержимое пробирок тщательно перемешайте и инкубируйте при температуре 18-25 0 С точно 20 минут. Фотометрируйте опытную и калибровочную пробы против контрольной пробы при длине волны 505 нм (490 – 520нм).
|
|
Мочу, требующую депротеинизации, можно исследовать не проводя этап подготовки к анализу. В этом случае мочу следует развести не в 100, а в 400 раз (1:399) и далее 1 мл ее использовать как супернатант. Ход анализа и расчет при этом не изменяется.
РАСЧЕТ концентрации (С) креатинина проведите по формулам:
Креатинин сыворотки / плазмы крови: С= (Епробы /Екал) х 177 (мкмоль/л)
Креатинин мочи: С= (Епробы /Екал) х 177х100/1000=(Епробы /Екал) х 17,7(ммоль/л)
или С=(Епробы /Екал) х 17,7хV(ммоль/сутки),
Где Е пробы – оптическая плотность исследуемой пробы,
Е кал – оптическая плотность калибровочной пробы,
177мкмоль/л – концентрация кретинина в калибраторе,
100 – разведение мочи,
1000 – перевод мкмоль в ммоль,
V – объем суточной мочи, л.
Содержание креатинина в сывороткекрови здоровых людей (норма): у женщин –
53-97 мкмоль/л, у мужчин - 61-115 мкмоль/л, у новорожденных ' (1-4-е сут) - 27-28 мкмоль/л, у детейдо года - 18-35 мкмоль/л, у детей старше года — 27-62 мкмоль/л, у подростков - 44-88 мкмоль/л.
Суммарное количество выделенного креатинина у здоровых мужчин составляет 8,8-17,6 ммоль/сут, т.е. 1-2 г/сут, а у женщин — 7,4-15 ммоль/сут, т.е. 0,8-1,5 г/сут.