Элюция адсорбированного белка

Элюцию белков с колонки можно осуществить изменением рН буфера до величины, при которой связывание белков с адсорбентом ослабевает, кроме того, повышением ионной силы буфера, что вызывает ослабление электростатического взаимодействия между белком и адсорбентом.

Аффинная хроматография

При аффинной хроматографии используют иммобилизованный на адсорбенте лиганд, осуществляющий специфический отбор белков, связывающихся с этим лигандом. После адсорбции фермент либо элюируют неспецифически (повышением концентрации соли) либо специфически (замещением белка лигандом) из раствора.

Гидрофобная хроматография

Метод гидрофобной хроматографии основан на связывании гидрофобного участка на поверхности белковой глобулы с алифатической цепью адсорбента. Гидрофобные взаимодействия усиливаются с повышением концентрации соли. При высаливании основной причиной агрегации является усиление гидрофобных взаимодействий между белками – при высоких концентрациях соли большинство белков будут адсорбироваться на гидрофобных группах, связанных с матрицей. Элюцию белков проводят с понижающимся градиентом концентрации соли. Белки, которые прочно адсорбируются, обычно удаляют с колонки добавлением в элюирующий раствор этиленгликоля.

Металлохелатная аффинная хроматография

Металлохелатная аффинная хроматография является наиболее распространенным методом очистки рекомбинантных белков. Один из приемов металлохелатной аффинной хроматографии основан на том, что некоторые аминокислоты, в частности, гистидин, способны формировать комплексы с ионами металлов. После иммобилизации на хроматографической фазе хелатирующих групп, целевой рекомбинантный белок, содержащий блок из нескольких остатков гистидина связывается с хроматографической фазой, после чего сопутствующие белки отделяются, и проводится элюция целевого белка. Кроме блока из остатков гистидина, целевой рекомбинантный белок может содержать последовательности глутатион-S-трансферазы, S-белка и других, при этом принципы хроматографического выделения целевого рекомбинантного белка остаются теми же. Недостатком метода является то, что создание соответствующего сорбента для этого вида хроматографии требует значительных усилий и сопряжено с серьезными методическими трудностями. В процессе эксплуатации сорбента происходит "вымывание" ионов металла из активных центров носителя, что сопровождается ухудшением его сорбционных характеристик.